Development of a real‐time PCR assay for detection of African swine fever virus with an endogenous internal control

A recombinase polymerase amplification (RPA)-based method was developed for rapid and specific detection of African swine fever virus (ASFV), the etiologic agent of African swine fever, a devastating disease of swine. Primers and the exo probe targeting the conserved region of the P72 gene of ASFV were designed and the reaction was run on the Genie III scanner device. Using recombinant plasmid DNA containing the P72 gene as template, we showed that the amplified product could be detected in less than 10 min and that the detection limit was 10 2 copies DNA/reaction [same detection limit as real-time polymerase chain reaction (PCR)]. The RPA assay did not cross-detect CSFV, PCV-2, PRV, PRRSV, or FMDV, common viruses seen in pigs. Tests of recombinant plasmid-spiked serum samples revealed that RPA and real-time PCR had the same diagnostic rate. The RPA assay, which is simple, cost-effective, and fast, is a promising alternative to real-time PCR for ASFV detection. Une méthode alliant la recombinase associée à l’amplification par la polymérase (RAP) fut développée pour la détection rapide et spécifique du virus de la peste porcine africaine (VPPA), l’agent étiologique de la peste porcine africaine, une maladie dévastatrice des porcs. Des amorces et une sonde exo ciblant la région conservée du gène P72 du VPPA ont été confectionnées et la réaction menée sur l’imageur Genie III. À l’aide d’un plasmide ADN recombinant contenant le gène P72 comme matrice, nous avons démontré que le produit d’amplification pouvait être détecté en moins de 10 min et que la limite de détection était de 10 2 copies d’ADN/réaction [même limite de détection que la réaction d’amplification en chaîne par la polymérase en temps réel (RAC)]. L’épreuve RAP ne montrait aucune réaction croisée avec les virus CSFV, PCV-2, PRV, PRRSV, ou FMDV, qui sont des virus fréquemment rencontrés chez les porcs. Des tests avec des échantillons de sérums artificiellement inoculés avec le plasmide recombinant ont montré que les tests RAP et RAC avaient la même valeur diagnostique. L’épreuve RAP, qui est simple, rapide et avec un coût acceptable, est une alternative prometteuse à l’épreuve RAC en temps réel pour la détection du VPPA. (Traduit par Docteur Serge Messier) Show more