Monitoreo inmunológico del éxito terapeútico en fasciolosis ovina empleando un antígeno semipurificado de < 30 kda Translated title: IMMUNOLOGICAL MONITORING OF CHEMOTHERAPEUTIC SUCCESS IN OVINE FASCIOLOSIS USING A SEMIPURIFIED ANTIGEN OF < 30KDa.

Abstract

RESUMEN Se evaluó el valor predictivo de éxito terapéutico de una fracción semipurificada de < 30 kDa de Fasciola hepatica, empleando ELISA y western blot (WB) en el reconocimiento antigénico por parte de ovinos infectados. Quince ovinos fueron infectados naturalmente después de permanecer un mes en un predio de una zona endémica. Los ovinos fueron evaluados individualmente cada mes, durante 12 meses, mediante examen coprológico, ELISA y WB. A los seis meses, seis de los quince corderos fueron tratados con un fasciolicida. Se emplearon sueros controles negativos y positivos a F. hepatica y "pools" de sueros ovinos con otras parasitosis y sin fasciolosis. Los resultados indicaron que el día 0, todos los ovinos y sus sueros fueron negativos a fasciolosis, según el examen coprológico, WB y ELISA respectivamente. El efecto del tratamiento fasciolicida en los 6 corderos tratados, se tradujo en la disminución gradual de los niveles de anticuerpos siendo significativas las diferencias entre tratados y controles a los 4 meses post tratamiento (p.t.) (p > 0,05) y siendo 5 de los 6 sueros de corderos tratados, negativos a ELISA después de 6 meses p.t. Mediante WB, se determinó que a los 2 meses p.t., la mitad de los ovinos tratados no lograron reconocer las bandas de 29 y 14 kDa (consideradas como altamente sensibles y específicas en el diagnóstico de fasciolosis). Hubo diferencias significativas en la proporción de positivos entre los ovinos tratados y controles a los 2 meses p.t. (p < 0,05). A los 5 meses p.t., hubo total ausencia de reconocimiento de las bandas de < 30 kDa y 14 kDa en los ovinos tratados. Los exámenes coprológicos señalaron la ausencia de infección en los corderos tratados, lo que fue corroborado posteriormente por la necropsia, la que a su vez, demostró la infección en los ovinos no tratados. Se concluye que la fracción semipurificada de < 30 kDa ensayada, contiene polipéptidos que ofrecen un gran potencial, no sólo desde el punto de vista diagnóstico sino que también como una herramienta a emplear para predecir el éxito terapéutico después de un tratamiento fasciolicida.

Translated abstract

The chemotherapeutic success of a semipurified Fasciola hepatica antigenic fraction of < 30kDa was evaluated in naturally infected sheep using ELISA and a Western blot (WB) assay. Sheep without fasciolosis were sent and kept in pastures where the infection is highly endemic. Serum samples from 15 sheep were monthly evaluated from day 0 to 12 months of infection by sedimentation coprological exams, ELISA and WB. Six months post infection (p.i.), six animals were treated with triclabendazole. Serum samples from sheep free of fasciolosis, sera from infected sheep and from sheep with other parasitic diseases were included as controls. Results obtained, indicated that the treatment effect became obvious by a reduction of antibody levels and a seroconversion to negative of 5 sheep after six months post treatment, however differences in the proportions of positive ELISA results among treated and control animals, became significant earlier, at 4 months post treatment (p < 0.05). The WB assays indicated that at 2 months after treatment, half of the treated sheep did not recognized bands < 30 kDa and a 14 kDa band (both being considered through previous studies as highly sensitive and specific in the diagnosis of fasciolosis). Differences in the proportion of positives in treated and control groups were already statistically significant at 2 months after treatment (p < 0.05). At 5 months after treatment, there was no recognition of both bands in any of the treated group. It was demonstrated through coprological exams and the post mortem examination of the animals, the absolute absence of infection in treated sheep and the presence of F. hepatica infection in control groups. It is therefore concluded that the semipurified fraction < 30 kDa contains polypeptides which might be veryuseful not only from a diagnostic point of view, but also as indicators in predicting chemotherapeutic success in animals treated against fasciolosis.