Purificación de una fracción de antígenos de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas Translated title: Purification of a trypomastigote antigen fraction from Trypanosoma cruzi for Chagas’ disease diagnosis

Abstract

Los antígenos excretados/secretados por las formas tripomastigotes de T. cruzi (antígenos TESA) pertenecen a la familia de las transialidasas, las cuales son responsables de la transferencia de ácido siálico exógeno a moléculas aceptadoras en la superficie de los tripomastigotes. En el presente trabajo se purifican varias proteínas de los antígenos TESA utilizando cromatografía de afinidad con resina de sefarosa B4-concanavalina A, con la intención de ser utilizados en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. El buffer de elución contenía una mezcla de α-D-manopiranósido y α-D-glucopiranósido. Se realizó electroforesis unidimensional en gel con poliacrilamida para identificar las bandas purificadas y la prueba de inmunoelectrotransferencia para visualizar las bandas reactivas con el pool de sueros de individuos con infección por T. cruzi. El gel teñido con azul de Coomassie coloidal permitió visualizar 3 bandas de aproximadamente 220, 170, y 20 kDa. La inmunoelectrotransferencia utilizando un pool de sueros positivos, confirmados para la infección por T. cruzi, reveló 5 bandas inmunogénicas de 220, 120, 85, 50 y 32 kDa mientras que el revelado con diaminobenzidina permitió observar las bandas de 220, 120, 85, 50 32 y 20 kDa. Asimismo las bandas purificadas no fueron reconocidas en la inmunoelectrotransferencia por el pool de sueros confirmados como negativos. Estos resultados sugieren el potencial de estas proteínas purificadas de TESA para ser usadas como nueva herramienta para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas

Translated abstract

Trypanosoma cruzi excreted/secreted antigens (TESA) belong to the transialidase family, which are responsible for the transfer of exogenous sialic acid to accepting molecules at the trypomastigote surface. In the present study we purified several proteins from TESA antigens using affinity chromatography with sepharose B4-concanavalin A resin, with the purpose of using them for Chagas’ disease diagnosis. The elution buffer contained a mixture of α-D-manopiranosid and α-D-glucopiranosid. A unidimensional electrophoresis in polyacrilamide gel to identify the purified bands, and an immunoelectrotransference test with a pool of sera from T. cruzi infected individuals to visualize the reactive bands were carried out. The colloidal Coomassie blue stained gel allowed visualizing 3 bands of approximately 220, 170 and 20 kDa. The immunoelectrotransference using a pool of positive sera with confirmed T. cruzi infection showed 5 immunogenic 220, 120, 50 and 32 kDa bands, while a developing with diaminobenzidine showed 220, 120, 85, 50, 32 and 20 kDa bands. The purified bands were not recognized in an immunoelectrotransference test when a pool of confirmed negative sera was used. These results suggest the potential of these TESA purified proteins for using them as a new tool for Chagas’ disease diagnosis