Optimización de una metodología para el aislamiento y detección molecular de huevos de Toxocara canis en muestras de suelo Translated title: Optimization a Methodology for the Isolation and the MolecularDetection of Toxocara Canis Eggs in Soil Samples

Abstract

La toxocariasis es una zoonosis común en países en desarrollo, como Colombia. La ingesta accidental de huevos de Toxocara sp representa la principal vía de transmisión al humano, por tanto, la vigilancia de la contaminación ambiental es una de las principales estrategias en la prevención de la toxocariasis. El objetivo fue optimizar una metodología para evaluar la contaminación del suelo porhuevos de Toxocara canis. Las muestras de suelo se colectaron en un parque público en la ciudad de Barranquilla (Colombia). Los huevos de Toxocara se aislaron mediante centrifugación/floculación con MgSO4 (r=1,20), ZnSO4 (r=1,18), NaCl (r=1,18) y solución de Sheather (r=1,27). El ADN del parásito se extrajo y se identificó mediante amplificación del ITS-2-ADNr (PCR-ITS-2) del T. canis y posterior secuenciación de nucleótidos. El análisis ANOVA indicó diferencia estadísticamentesignificativa (p <0,05) entre las concentraciones de ADN obtenidos con las soluciones de floculación utilizadas para aislar los huevos. Los resultados del test de Tukey sugieren que la solución modificadade Sheathers es la mejor para la floculación. El análisis PCR-ITS-2 mostró resultado positivo para T. canis en 7 de 13 muestras examinadas (53,84%). En conclusión, se demuestra que el método propuestoes eficiente por la detección de T. canis en muestras de campo

Translated abstract

Toxocariasis is a common zoonosis in developing countries, such as Colombia. Accidental ingestion of Toxocara sp. eggs represents the principal form of transmission in humans. Therefore, monitoring of environmental contamination is the better strategy for preventing the toxocariasis. The objective was to optimize a methodology for assessing soil contamination caused by Toxocara canis eggs. The soil samples were collected from a public park in the city of Barranquilla (Colombia). The Toxocara eggs were isolated by centrifugation/flocculation with MgSO4 (r = 1.20), ZnSO4(r= 1.18), NaCl (r= 1.18) and Sheather solution (r= 1.27). The parasite DNA was extracted and identified through amplification of ITS-2- DNAr (PCR-ITS-2) of T. canis and subsequent nucleotidesequencing. ANOVA analysis indicates a statistically significant difference (p <0.05) between the DNA concentrations obtained with the flocculation solutions used to isolate eggs. Tukey test results suggest that the modified Sheather´s solution is better for the flocculation. The PCR-ITS-2 analysis showed positive results for T. canis in 7 out of 13 samples examined (53.84 %). In conclusion, it is shown that the proposed method is efficient for the detection of T. canis in field samples